在文(wén)獻或共識中，經常看到(dào)針對于神經系統自身免疫性疾病檢測時，推薦使用(yòng) CBA、TBA、ELISA 檢測方法或多種方法聯合檢測陽性率更高(gāo)，那到(dào)底什(shén)麽是CBA、TBA 和(hé) ELISA 檢測呢？
還有(yǒu)，從表面上(shàng)看，CBA 法的(de)敏感性高(gāo)特異性好，TBA 法檢測價值有(yǒu)限，但(dàn)事實真是這樣嗎？
一、CBA、TBA、ELISA 的(de)區别？
1. 細胞免疫雙熒光(guāng)法（CBA）
基于細胞轉染的(de)間接免疫熒光(guāng)法，其作用(yòng)原理(lǐ)是将抗原基因導入哺乳動物(wù)細胞，使細胞大(dà)量特異性表達目的(de)抗原，患者标本中的(de)抗體（一抗）與抗原特異性結合，随後利用(yòng)熒光(guāng)标記的(de)二抗結合一抗，根據顯微鏡下觀察的(de)熒光(guāng)情況判讀(dú)結果。
圖：CBA 法作用(yòng)原理(lǐ)示意圖
由于 CBA 法轉染表達極大(dà)程度上(shàng)還原了抗原結構，因此其特異性和(hé)敏感性均受到(dào)認可(kě)。但(dàn) CBA 法僅能(néng)進行(xíng)單一靶标抗原檢測，當臨床症狀不夠典型或臨床信息不足時，僅選擇檢測某一類疾病抗體可(kě)能(néng)會(huì)導緻其他(tā)抗體漏檢。适當增加抗體檢測，有(yǒu)利于提高(gāo)陽性率。
2. 組織免疫熒光(guāng)法（TBA）
基于組織爲基質的(de)間接免疫熒光(guāng)法，其原理(lǐ)是将動物(wù)腦(nǎo)組織切片與患者血清或腦(nǎo)脊液一起處理(lǐ)後加入熒光(guāng)标記的(de)二抗，與大(dà)腦(nǎo)海(hǎi)馬及小(xiǎo)腦(nǎo)特定細胞或者結構結合的(de)抗體最終均會(huì)發出熒光(guāng)，常用(yòng)于未知抗體的(de)篩查和(hé)已知抗體的(de)組織确認。
由于 TBA 法可(kě)提供全抗原譜，通過特異性熒光(guāng)可(kě)檢測到(dào)未知的(de)神經特異性抗體，适用(yòng)于所有(yǒu)針對神經元細胞膜及胞内抗原的(de)自身抗體檢測。但(dàn) TBA 法特異性不夠，陽性結果需結合 CBA 法進行(xíng)抗原種類确認。
根據《中國自身免疫性腦(nǎo)炎診治專家共識（2022年版）》，自身免疫性腦(nǎo)炎的(de)确診實驗爲抗神經細胞抗體陽性，間接免疫熒光(guāng)法（IIFT）是目前檢測自身免疫性腦(nǎo)炎抗神經元表面抗原抗體和(hé)部分(fēn)抗神經突觸胞内抗原抗體的(de)主要檢測方法，而 IIFT 主要包括的(de)就是 CBA 法和(hé) TBA 法兩種。
所以，由于 TBA 檢測的(de)必要性和(hé)重要性，在自身免疫性腦(nǎo)炎的(de)抗體譜常規檢測中，建議還是 TBA 和(hé) CBA 同時檢測。同時 TBA 法還可(kě)幫助臨床發現可(kě)能(néng)的(de)新抗體。
3. 酶聯免疫吸附劑測定（ELISA）
ELISA 競争法，也(yě)被稱爲 ELISA 阻斷法，是 ELISA 技術(shù)中最複雜的(de)一種。其原理(lǐ)是将已知的(de)抗原或抗體結合在固相(xiàng)載體表面，然後利用(yòng)酶标記（偶聯）的(de)抗體或抗原與之孵育，樣本中的(de)抗原或抗體可(kě)競争性地(dì)與固相(xiàng)載體結合，再通過顯色劑顯色，顯色結果深淺與待檢抗原或抗體的(de)量成反比。
圖：競争法檢測抗體原理(lǐ)示意圖
ELISA 競争法通常用(yòng)于檢測小(xiǎo)分(fēn)子如(rú)半抗原、激素、藥物(wù)等，可(kě)檢測不純的(de)樣品，數據再現性高(gāo)，但(dàn)存在整體敏感性和(hé)專一性較差的(de)問題。而 CBA 法敏感性高(gāo)、穩定性好，能(néng)避免酶聯免疫放(fàng)大(dà)技術(shù)使信号失真導緻的(de)假陽性。
二、CBA、TBA、ELISA 怎麽選擇？
目前，國外常規檢測策略是先用(yòng) TBA 篩查是否有(yǒu)抗神經元抗體表達，再用(yòng) CBA 法鑒定具體抗體。若 CBA、TBA 均陽性，則認爲相(xiàng)關抗體陽性。因此在條件(jiàn)允許的(de)情況下，CBA、TBA 同時檢測是最佳的(de)，而 ELISA 與 CBA 是相(xiàng)似的(de)，但(dàn)是 ELISA 更适用(yòng)于定量檢測。
當 CBA 檢測陰性，而 TBA 顯示特異性熒光(guāng)時，提示存在相(xiàng)關特異性抗體，實驗室應及時與臨床溝通，增加相(xiàng)關抗體檢測。此外，爲避免因轉染率或平台穩定性等因素導緻的(de)假陽性結果，罕見抗體必須使用(yòng) TBA 法進行(xíng)确認，以免誤導臨床。
CBA 法與 ELISA 法都(dōu)是檢測分(fēn)泌到(dào)細胞外的(de)遊離(lí)狀态的(de)細胞因子。與 ELISA 法相(xiàng)比，CBA 法一次能(néng)同時測定多種細胞因子，而 ELISA 法一次隻能(néng)測定一種。CBA 法大(dà)幅度節省了檢測的(de)時間和(hé)簡化了操作步驟，且所需的(de)樣品量較少(shǎo)，但(dàn) CBA 法在定量檢測方面不如(rú) ELISA 法準确。
即檢測單一細胞因子的(de)時候推薦 ELISA 法，多個(gè)細胞因子的(de)時候推薦 CBA 法，一片細胞因子的(de)時候推薦 TBA 法。檢測方法并無優劣之分(fēn)，隻是哪個(gè)檢測更加适合這一次的(de)抗體檢測。
